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非洲猪瘟快检试剂盒设备

产品特点:
北京康森非洲猪瘟病毒荧光PCR检测试剂盒可用于生猪血液、血球粉、淋巴结、脾脏、扁桃体中非洲猪瘟病毒核酸的检测。非洲猪瘟快检试剂盒设备价格优惠,厂家现货直销。
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产品介绍

非洲猪瘟快检试剂盒设备

北京康森非洲猪瘟快检试剂盒主要成分与含量】

  组成    组 份规 格
A盒Buffer A25 mL/瓶x1瓶
Buffer B60 mL/瓶x1瓶
BufferC1250 μL/管x2管
DNase-Free吸附柱和收集管50套
B盒荧光PCR反应液1000 μL/管x1管
Taq酶30 μL/管x1管
阴性对照1000 μL/管x1管
阳性对照1000 μL/管x1管
说明书1份/盒

 【北京康森非洲猪瘟快检试剂盒用法与判定】

1.样品处理

血液样品直接用;

淋巴结、脾脏、扁桃体样品,用无菌的剪刀和镊子剪取待检样品2.0 g于研钵中充分研磨,再加10.0 mL PBS(pH 7.2,含1万单位青霉素和1万单位链霉素)混匀(样品不足2.0 g按1:5比例加PBS),对处理的待检样品置70℃,30 min灭活后,3 000 r/min,4 ℃离心5 min,取上清液,编号备用;血球粉处理同上,只不过省掉研磨步骤。

2.样品存放

采集或处理好的样品在2℃~8℃条件下保存应不超过24 h;若需长期保存,须放置-80 ℃冰箱,但应避免反复冻融(冻融不超过3次)。

3.操作步骤

3.1 病毒DNA的提取(使用A盒)

(1)待检样品、阳性对照和阴性对照的份数总和用n表示,取n个灭菌的1.5 mL离心管,逐管编号。

(2)每管加入Buffer A 500 L。

(3)每管分别加入已处理的待检样品、阳性对照、阴性对照各200 L,充分混匀,室温放置10分钟。

(4)取与上述离心管等量的DNase-Free吸附柱和收集管,编号。将离心管中的溶液转移至DNase-Free吸附柱,(为避免堵塞吸附柱,尽量不要吸悬浮杂质)。

(5)13000 r/min室温离心30 sec。

(6)弃去收集管液体,将吸附柱放回收集管中。

(7)吸附柱内加入600 μL Buffer B,13000 r/min离心30 sec。

(8)弃去收集管液体,将吸附柱放回收集管中。

(9)重复步骤(7),(8)。

(10)13000 r/min空柱离心2 min,去除残留液。

(11)将每个吸附柱分别移入新的1.5mL离心管中,向柱中央加入50 μL Buffer C,室温静置1 min,13000 r/min离心30 sec,离心管中液体即为模板DNA。获得的DNA溶液,冰上保存备用(注意提取的DNA须在2 h内进行PCR 扩增,若需长期保存须放置-80 ℃冰箱,但应避免反复冻融)。

3.2 荧光PCR扩增(使用B盒)

(1)从试剂盒中取出荧光PCR反应液、Taq酶,室温融化后,2 000 r/min离心5 sec。设所需PCR管数为n(n = 样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系需要20 μL 荧光PCR反应液和0.5 μL Taq酶。计算好各试剂的使用量,加入一适当体积小管中,充分混合均匀后,向每个PCR管中各分装20 μL。

(2)分别向上述PCR管中加入1.3.1(11)中制备的DNA溶液各5μL,盖紧管盖,500 r/min 离心30 sec。

(3)将加样后的PCR管放入荧光PCR检测仪内,作好标记。反应参数设置:

*阶段,预变性95℃/3 min;第二阶段,95℃/15 sec,52℃/10 sec,60℃/35 sec共45个循环。荧光收集在第二阶段每次循环的60℃延伸时进行。

4.非洲猪瘟快检试剂盒结果判定

4.1 结果分析条件的设定  

阈值设定原则:根据仪器噪声情况进行调整,以阈值线刚好超过阴性对照品扩增曲线的高点为准。对于多通道荧光PCR仪,选定FAM(465-510)检测通道读取检测结果,ABI仪器选择FAM无荧光淬灭基团。

4.2 质控标准

4.2.1 阴性对照无Ct值并且无扩增曲线。

4.2.2 阳性对照的Ct值应小于等于28,并出现典型的扩增曲线。

4.2.3 如阴性和阳性对照不满足以上条件,此次实验视为无效。

4.3 结果判定

4.3.1 阴性:无Ct值,且无特征性扩增曲线,表明样品为阴性。

4.3.2 阳性:Ct值≤38.0,且出现典型的扩增曲线,表示样品为阳性。

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